關(guān)于血清蛋白電泳——您知道多少(一)檢測(cè)技術(shù)
更新時(shí)間: 點(diǎn)擊:15035 所屬欄目:經(jīng)驗(yàn)分享 Update Time: Hits:15035 Belong Column:血清蛋白電泳(serum poteinelectrophoresis,SPE)是利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子大小的不同,在同一PH值緩沖液中所帶電荷的差異性,在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度和方向不同,使不同的蛋白質(zhì)分子具有不同的電泳遷移率,從而把血清蛋白分為不同的區(qū)帶,然后不同的區(qū)帶進(jìn)行定量分析。
檢測(cè)方法
血清電泳的檢測(cè)方法有多種,有Tiselius自由電泳,醋酸纖維素膜電泳,瓊脂糖凝膠電泳,淀粉膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠圓盤(pán)電泳,濃度梯度板狀膠電泳,微型雙向電泳,毛細(xì)管電泳等。電泳方法不同,分離血清蛋白的能力則有很大差異。目前,臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中采用的瓊脂糖凝膠電泳和毛細(xì)管電泳。
1. 瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)血清蛋白電泳:
瓊脂糖主要通過(guò)氫鍵而形成凝膠。電泳時(shí)因凝膠含水量大(98-99%),近似自由電泳,因?yàn)楣腆w支持物的影響少,故電泳速度快,區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團(tuán),電滲影響很少,是一種較好的電泳材料,分離效果較好。
瓊脂糖凝膠電泳分離血清蛋白方法簡(jiǎn)單。將血清蛋白樣本通過(guò)加樣梳點(diǎn)在瓊脂糖凝膠上然后將凝膠置于電場(chǎng)中,此時(shí)血清中的不同蛋白質(zhì)就會(huì)在電場(chǎng)中發(fā)生移動(dòng),在電泳結(jié)束時(shí)根據(jù)使用緩沖液的不同,蛋白質(zhì)被分五個(gè)區(qū)帶或六個(gè)區(qū)帶,然后將凝膠烘干,使用對(duì)蛋白親和力強(qiáng)的氨基黑燃料進(jìn)行染色,通過(guò)光密度儀或掃描儀對(duì)各個(gè)區(qū)域的蛋白檢測(cè),從而得到血清蛋白各組分的百分比濃度,也可以測(cè)定總蛋白的濃度后,計(jì)算出各個(gè)區(qū)帶的濃度值。
2. 毛細(xì)管電泳法檢測(cè)血清蛋白電泳:
毛細(xì)管電泳(Caillary Electrophoresis)簡(jiǎn)稱CE,是一類以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離分析技術(shù)。毛細(xì)管電泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出,他們使用了75mm的毛細(xì)管柱,用熒光檢測(cè)器對(duì)多種組分實(shí)現(xiàn)了分離。
毛細(xì)管電泳和高效液相色譜(HPLC)一樣,同是液相分離技術(shù)。無(wú)論從效率、自動(dòng)化、檢測(cè)速度、樣品用量和成本來(lái)說(shuō),毛細(xì)管電泳都顯示了一定的優(yōu)勢(shì)。毛細(xì)管電泳(CE)除了比其它色譜分離分析方法具有效率更高、速度更快、樣品和試劑耗量更少、應(yīng)用面同樣廣泛等優(yōu)點(diǎn)外,其儀器結(jié)構(gòu)也比高效液相色譜(HPLC)簡(jiǎn)單。
血清蛋白在使用毛細(xì)管電泳檢測(cè)后可以得到六個(gè)區(qū)帶,即將血清蛋白分為六個(gè)組分。
分類及參考區(qū)間
1. 瓊脂糖凝膠法分類:目前臨床實(shí)驗(yàn)室使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)血清蛋白電泳主要分為5個(gè)區(qū)帶。具體分類與參考區(qū)間見(jiàn)下表:

2. 毛細(xì)管電泳法分類:血清蛋白電泳主要分為6個(gè)區(qū)帶。具體分類與參考區(qū)間見(jiàn)下表:
臨床應(yīng)用
血清蛋白常被用做作為下列疾病監(jiān)控和診斷。
1.急性感染性疾病
2.慢性感染性疾病
3.蛋白丟失類疾病,如腎臟疾病、胃腸道疾病、皮膚類疾?。齻∪耍?、滲出液和漏出液相關(guān)疾病、肝臟疾病等
4.單克隆免疫球蛋白血癥(多發(fā)性骨髓瘤等疾?。?/span>
5.在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室可以觀察到的異常結(jié)果。紅細(xì)胞沉降率加快,蛋白尿,血清總蛋白濃度增高或降低。