測(cè)定原理

      液壓聚焦法 （DC檢測(cè)）

      RBC檢測(cè)器通過(guò)液壓聚焦法 （DC檢測(cè)）計(jì)數(shù)RBC和PLT。同時(shí)，血細(xì)胞比容(HCT)通過(guò)RBC脈沖高度檢測(cè)法計(jì)算。在該檢測(cè)器內(nèi)，樣本噴嘴將被定位在小孔的前面且與中心對(duì)齊。稀釋后的樣本由樣本噴嘴被推入錐形室以后，在前鞘流內(nèi)的試劑包裹下通過(guò)小孔的中心。

       通過(guò)小孔以后，經(jīng)過(guò)稀釋的樣本被送入捕集管中。這樣就可以防止該區(qū)域的血細(xì)胞回流，并防止產(chǎn)生假性血小板脈沖。

液壓聚焦法改善了血細(xì)胞計(jì)數(shù)的精確度和重現(xiàn)性。同時(shí)由于血細(xì)胞通過(guò)在一條直線上的小孔，所以也可防止產(chǎn)生異常血細(xì)胞脈沖。

        使用半導(dǎo)體激光器的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法

使用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞和其它生物粒子的物理和化學(xué)性質(zhì)。該計(jì)數(shù)法只需很少的樣本就可對(duì)這些細(xì)胞和粒子進(jìn)行檢測(cè)。

       一個(gè)血樣經(jīng)過(guò)抽吸和測(cè)量并被稀釋至指定的稀釋比后，再進(jìn)行染色。然后該樣本將被送入貫流分析池中。

這種液壓聚焦單元改進(jìn)了細(xì)胞計(jì)數(shù)的精確度和重現(xiàn)性。同時(shí)，由于血細(xì)胞顆粒是排成一行通過(guò)貫流分析池的中心，故而防止產(chǎn)生異常血液脈沖并可減少對(duì)貫流分析池的污染。

        半導(dǎo)體激光束 （波長(zhǎng)： 633 nm）通過(guò)貫流分析池照射到血細(xì)胞上。前向散色光和側(cè)向散色光將被光電二極管接收，側(cè)向熒光則由APD光電二極管接收。光信號(hào)被轉(zhuǎn)化為電脈沖，從而可以得到有關(guān)血液細(xì)胞的信息。

        前向散射光和側(cè)向散射光

        當(dāng)障礙物經(jīng)過(guò)光通路時(shí)，光束就在每個(gè)障礙物的不同方向上產(chǎn)生出散射光。這種現(xiàn)象稱為光散射。通過(guò)檢測(cè)散射光，可以得到有關(guān)細(xì)胞體積大小和材質(zhì)的信息。

         同樣地，當(dāng)一束激光照射到血細(xì)胞顆粒上時(shí)，就產(chǎn)生光散射。散射光的強(qiáng)度取決于諸如顆粒直徑和觀察角度等因素。本單元對(duì)前向散射光進(jìn)行檢測(cè)，提供有關(guān)血液細(xì)胞體積大小的信息；同時(shí)對(duì)側(cè)向散射光進(jìn)行檢測(cè)，提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)部 （如細(xì)胞核的體積大?。┑男畔ⅰ?/span>

     側(cè)向熒光

     當(dāng)光照射到經(jīng)過(guò)熒光染色的血液細(xì)胞等的熒光材料上時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生比入射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光。隨著染色濃度的增加，熒光強(qiáng)度也隨之增長(zhǎng)。通過(guò)測(cè)量熒光強(qiáng)度，可以得到有關(guān)血細(xì)胞染色程度的信息。熒光向所有方向散射，本儀器檢測(cè)側(cè)向發(fā)出的熒光。

      SLS-血紅蛋白法

      在過(guò)去，用于自動(dòng)測(cè)量血紅蛋白的主流辦法是：氰化高鐵血紅蛋白法和氧合血紅蛋白法。但是，當(dāng)將這些方法用于像本儀器這樣的大型全自動(dòng)檢測(cè)儀時(shí)，它們既有優(yōu)點(diǎn)又有缺點(diǎn)。

氰化高鐵血紅蛋白檢測(cè)法是1966年由國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì) （ICSH）作為一種國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法而提出的。但是由于該方法的血紅蛋白轉(zhuǎn)化速度較慢，并且以多樣本處理為前提，該方法實(shí)際上不適用于自動(dòng)檢測(cè)。而且，由于該方法使用了有毒性的試劑氰化物，所以必須對(duì)廢液進(jìn)行處理，從而從環(huán)保的角度來(lái)講，該方法并不受推崇。

       目前，特別是對(duì)于排出大量廢液的大型全自動(dòng)檢測(cè)儀而言，這不是一種合適的檢測(cè)方法。

相反，氧合血紅蛋白檢測(cè)法的血紅蛋白轉(zhuǎn)化速度很快，因?yàn)檠t蛋白很容易轉(zhuǎn)化為氧合血紅蛋白。同時(shí)，由于該方法不使用諸如氰化物這樣的毒性物質(zhì)，所以該方法適用于自動(dòng)檢測(cè)。然而，該方法卻不能將高鐵血紅蛋白轉(zhuǎn)化為氧合血紅蛋白。對(duì)于正常人體血液，該方法沒(méi)有問(wèn)題。但是對(duì)于含有大量高鐵血紅蛋白的樣本 （如質(zhì)控品樣本） ，就會(huì)導(dǎo)致測(cè)量值低于真實(shí)值。

        SLS-血紅蛋白檢測(cè)法是一種利用了上述兩種方法優(yōu)點(diǎn)的檢測(cè)方法。

與氧合血紅蛋白檢測(cè)方法一樣，SLS-血紅蛋白檢測(cè)法的血紅蛋白轉(zhuǎn)換速度很快，而且該方法不使用毒性物質(zhì)，這使該方法成為自動(dòng)檢測(cè)的一個(gè)合適的方法。

同時(shí)，由于該方法可以用于檢測(cè)高鐵血紅蛋白，所以該方法也可以準(zhǔn)確的檢測(cè)含有高鐵血紅蛋白的血液 （如質(zhì)控品） 。

 測(cè)定項(xiàng)目與通道

       WBC測(cè)定

       WNR通道

       WNR通道主要是用于計(jì)數(shù)白細(xì)胞和有核紅細(xì)胞的通道。

通過(guò)使用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法，可描畫出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側(cè)向熒光強(qiáng)度（SFL），Y軸表示前向散射光強(qiáng)度（FSC）。

       此散點(diǎn)圖顯示有核紅細(xì)胞、嗜堿基球、嗜堿基球以外的白細(xì)胞及碎片 （溶血的紅細(xì)胞和血小板等）的各組。

         WDF通道

         WDF通道主要是為分類白細(xì)胞的通道。

通過(guò)使用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法，可描畫出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側(cè)向散射光強(qiáng)度（SSC），Y軸表示側(cè)向熒光強(qiáng)度（SFL）。

        此散點(diǎn)圖顯示淋巴球、單球、嗜酸球、嗜堿基球+嗜中球以及碎片的各組。

         WPC通道

         WPC通道是用于檢測(cè)骨髓芽球等未成熟細(xì)胞及淋巴球系的異常細(xì)胞的通道。

通過(guò)使用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法，可描畫出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側(cè)向散射光強(qiáng)度（SSC），Y軸表示側(cè)向熒光強(qiáng)度 SFL）。

        此散點(diǎn)圖顯示未成熟細(xì)胞、異常細(xì)胞及成熟白細(xì)胞的各組。

         RBC/阻抗法檢測(cè)的PLT數(shù)測(cè)定

         RBC粒度分布

RBC （紅細(xì)胞計(jì)數(shù)）是在一個(gè)低界標(biāo)（LD）和高界標(biāo)（UD）之間計(jì)算得出的細(xì)胞計(jì)數(shù)，這兩個(gè)界標(biāo)分別自動(dòng)設(shè)置在25 - 75 fL和200 - 250 fL之間。

        對(duì)顆粒大小分布情況的檢查將有助于了解異常情況，其中包括在不同界標(biāo)水平上的異常相對(duì)頻率、兩個(gè)或多個(gè)峰值的存在以及異常的分布寬度。

        本儀器根據(jù)如下所示的兩種方法來(lái)表達(dá)紅細(xì)胞分布寬度 （RDW）。

RDW-SD

        假設(shè)峰值高度為100%，在20%頻率水平上的分布寬度即為RDW-SD。使用的單位為飛升（fL）（1 fL = 10-15L）。

        RDW-CV

        點(diǎn)L1和L2在總分布區(qū)域中的出現(xiàn)頻率為68.26%，使用下列方程計(jì)算RDW-CV：

          PLT粒度分析

          PLT （血小板計(jì)數(shù)）是在一個(gè)低界標(biāo) （LD）和高界標(biāo) （UD）之間計(jì)算得出的細(xì)胞計(jì)數(shù)，這兩個(gè)界標(biāo)分別自動(dòng)設(shè)置在2 - 6 fL和12 - 30 fL之間。

對(duì)PLT顆粒大小分布情況的檢查將有助于了解導(dǎo)常情況，其中包括低界標(biāo)上的相對(duì)頻率、異常分布寬度以及多個(gè)峰值的存在。

         PDW （計(jì)算的血小板分布幅度）

假設(shè)峰值高度為100%，在20%頻率水平上的分布寬度即為PDW。使用的單位為飛升（fL）（1 fL = 10-15L）。

         l  P-LCR （大型血小板比率）

         P-LCR為由12 fL界標(biāo)或更大界標(biāo)得到的巨型血小板的比值。計(jì)算時(shí)，將固定界標(biāo)與高界標(biāo)之間的顆粒數(shù)，同低界標(biāo)與高界標(biāo)之間的顆粒數(shù)相比而得到一個(gè)比值。

         MPV （平均血小板體積）

         使用下列計(jì)算式計(jì)算MPV：

         PCT：PCT稱為血小板血細(xì)胞比容或血小板容積比，并根據(jù)PLT頻率進(jìn)行加權(quán)。

由于表現(xiàn)的方法不同，所得到粒度分布的印象會(huì)差別很大。由于粒度分布的寬度會(huì)由于所使用的表現(xiàn)方法不同而完全不同，所以需要特別予以注意。

        本儀器使用一個(gè)常規(guī)的粒度分布表現(xiàn)（通常表現(xiàn)）和另外一種粒度分布表現(xiàn)法（粒度正常范圍表現(xiàn)），使用該方法可使用戶根據(jù)粒度分布直觀地得到大量信息。

        通常表現(xiàn)

        將粒度分布的峰值設(shè)置為全尺度（顯示粒度分布時(shí)的最大高度），該表示方法將分布情況以規(guī)范的形式表示出來(lái)。

 特長(zhǎng)：可在同一尺度上觀察具有不同計(jì)數(shù)值的粒度分布形式。粒度分布的寬度可進(jìn)行直觀對(duì)比。

 支持的顯示領(lǐng)域：RBC和阻抗法檢測(cè)的PLT數(shù)。

        粒度正常范圍表現(xiàn)

        此表現(xiàn)方法不是將粒度分布的峰值作為全尺度（顯示粒度分布時(shí)的最大高度）。而是將經(jīng)驗(yàn)求得的粒度正常范圍的峰值作為全尺度，該表示方法將分布情況以規(guī)范的形式表示出來(lái)。同時(shí)，此方法疊加粒度分布的正常范圍。

但是，如果粒度分布的峰值比粒度正常范圍的峰值要高，就將粒度分布的峰值作為全尺度來(lái)表現(xiàn)。在這種情況下，粒度正常         范圍就根據(jù)粒度分布峰值的高度成比例減小。

       將大量健康人的粒度分布疊加起來(lái)，然后利用第10個(gè)百分位到第90個(gè)百分位之間的區(qū)域，就可以得出粒度正常范圍。

特長(zhǎng)：可從粒度分布圖上直觀地看出顆粒數(shù)的大小。如果粒度分布偏離正常范圍，可以立即知道粒度分布形式出現(xiàn)了異常。

 支持的顯示領(lǐng)域：如果將設(shè)置值預(yù)置為正常范圍，則可以支持顯示RBC和PLT的粒度分布。

         PLT-F通道*

         PLT-F通道用于正確計(jì)數(shù)血小板，特別是低值的血小板數(shù)。

通過(guò)使用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法，可描畫出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側(cè)向熒光強(qiáng)度（SFL），Y軸表示前向散射光強(qiáng)度（FSC）。

         此散點(diǎn)圖顯示血小板、一部分紅細(xì)胞、一部分白細(xì)胞及碎片的各組。

        RET測(cè)定

        RET通道*

        通過(guò)使用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法，可描畫出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側(cè)向熒光強(qiáng)度（SFL），Y軸表示前向散射光強(qiáng)度（FSC） 。

        此散點(diǎn)圖顯示網(wǎng)狀紅細(xì)胞、成熟紅細(xì)胞和血小板各組。

根據(jù)熒光的強(qiáng)度，將散點(diǎn)圖劃分為三個(gè)RET區(qū)，并計(jì)算各區(qū)中網(wǎng)織紅細(xì)胞與網(wǎng)織紅細(xì)胞總數(shù)的比率。

      網(wǎng)狀紅細(xì)胞比率:

       網(wǎng)狀紅細(xì)胞數(shù):

        低熒光比率：

LFR = 100 - HFR - MFR

中熒光比率：

       高熒光比率：

         未成熟網(wǎng)狀紅細(xì)胞指數(shù):

         IRF = MFR + HFR

         LFR——低熒光比率

         MFR——中熒光比率

         HFR——高熒光比率

         IRF——未成熟網(wǎng)狀紅細(xì)胞指數(shù)

         RET-He（網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量）是由Sysmex開發(fā)出的獨(dú)特項(xiàng)目,它使用網(wǎng)狀紅細(xì)胞散射光信號(hào)和專有的Sysmex專用的運(yùn)算法則。

                                                                                                                                                      ——摘自XN系列操作手冊(cè)